2. 1　 细胞毒性实验结果细胞毒性实验结果见表 1。实验组中无论是粉剂组还是混合物组 ,各浓度对细胞未表现出毒性作用 ,各时间段 MTT值均与阴性对照组无显著性差异 ( P > 0105) 。表 　 实验结果 1 MTT T ab 1　Results of MTT assay 时间( ) d 组别　　1　　　　　　　3　　　　　　　5　　对照组 0. 124±0. 020 0. 255±0. 010 0. 401±0. 030 P 1 0. 120±0. 100 0. 248±0. 090 0. 396±0. 130 ± ± ± P 2 0. 119 0. 110 0. 249 0. 150 0. 398 0. 060 P 3 0. 122±0. 030 0. 245±0. 120 0. 401±0. 080 P 4 0. 121±0. 020 0. 252±0. 060 0. 402±0. 210 P 5 0. 125±0. 010 0. 256±0. 030 0. 404±0. 070 M 1 0. 124±0. 070 0. 245±0. 200 0. 401±0. 330 M 2 0. 119±0. 080 0. 252±0. 130 0. 399±0. 190 M 3 0. 121±0. 040 0. 251±0. 050 0. 400±0. 310 M 4 0. 123±0. 120 0. 255±0. 140 0. 403±0. 170 M 5 0. 126±0. 110 0. 257±0. 200 0. 405±0. 330 2. 2　 微核实验结果图 1箭头所示即为所形成的微核 — — — 细胞质内的染色体样物质 ,计算微核形成数量时是在高倍镜下 ( ×40) ,随机视野下计数 1 000 个细胞中的微核数。每张玻片计数 3次取平均值 ,而每组 3张玻片的均值为该组的微核数。无论是粉剂组(6 1 ±1 1 1 000)还是混合物组(5 7 ±0 6 1 000) ,其浸1 提液所 1 ?诱导的微核数目与阴性对 1 照组 1(?5 3 ±0 8 1 000)无显著性差异 ( P > 0 05) ,而与阳性对1 照组( 1 12 ?3 9±8 1 000)有显著性差异 1( 1 ? P < 0 05) ,说明该新型纳米材料未表现出基因毒性。 1 图 1　 阳性对照组所形成的微核　姬姆萨染色　×40 Fig 1　Micronucleus formed in the positive control 　G iemsa　×403　 讨论体外微核法作为检测基因毒性用于毒理研究已得到公认 ,近年来随着口腔新材料的不断涌现 ,对口腔材料的毒理研究也日益受到重视。作为长期存留于口腔内的根充材料 ,其生物相容性的好坏将直接影响根充的质量及根尖周组织的修复反应。除了细胞及组织毒性的研究外 ,牙科材料的基因毒性也被认为 [3 ] 是评价新型材料的必须步骤 。大量研究表明体外微核法应成为口腔新型材料临床应用前的生物相容性研究的不可缺少的一部分 ,体外微核法对于检测新材料的基因毒性有很好的敏感性和特异性 ,且简单易 [4 ] 行、 可自动化计数及重复性好 。利用特殊的细胞系 ,它可敏感的表现在材料的影响下细胞所发生的染色体结构和数量上的异常变化。V79 细胞是中国仓鼠肺成纤维细胞 ,是永生细胞系 ,当其接触有基因毒性的材料时 ,其染色体分裂发生障碍 ,出现染色体的断裂或滞后 ,导致在分裂后期染色体不能正常分配到子代细胞中 ,从而表现出细胞质中的染色体样物质 — — — 微核 ,通过微核数量的多少可判断出材料的染色 [5 ] 体毒性 。本实验采用了材料的培养基浸提液来评价材料的基因毒性 ,有研究表明当对材料的毒性作用进行研究时 ,可用材料的浸提液代表材料本身 ,其可析出成分对实验细胞的作用能较好的反映材料成分的作 [6 ] 用 。本实验为了避免其他化学提取液本身对 V79 细胞作用的干扰 ,采用了细胞培养基作为材料的浸提液。在毒理试验中 ,通常需在进行基因毒性实验前先进行细胞毒性实验 ,以确定实验材料抑制 30 %～ 80 %细胞生长的浓度 ,再选其范围内的浓度作为基因毒性的实验浓度 ,本实验中的 MTT实验即是此目的。本实验中新型纳米根管充填材料 nHA- PA66 由粉液两组分构成 ,粉剂主要是纳米羟磷灰石与聚酰胺的复合物 ,液剂为聚合反应的启动成分。当两组分混合后即开始聚合反应 ,材料的流动性逐渐降低而硬固 ,并 [2 ] 伴有一定的体积微膨胀 。有研究显示高分子类根充材料在聚合反应开始至 24 h 其细胞毒性逐渐上 [7 ] 升 ,其后开始下降 ,本实验采用单纯粉剂和固化 24 h的混合物的浸提液作为材料的代表。实验结果表明新型纳米根充材料并未表现出细胞毒性 ,实验组细胞与对照组的线粒体活性在相同时间段均无显著性差异 ,而阴性对照组仅为 V79 细胞培养基 ,说明材料对细胞的生长无抑制作用。微核的计算结果表明材料也无基因毒性 ,由于本实验中材料的浸提液在最高浓度时也并未表现细胞毒性 ,所以在进行基因毒性logy Vol . 22 No. 2 April ,2004 ·95 · 实验时 ,笔者采用了最高浓度作为实验浓度。粉剂及混合物组导致的微核数与阴性对照组相比均无显著性差异 ,而阳性对照组形成的微核数为前者的 18 倍 [8 ] 左右 ,这与以往文献报道一致 ,说明材料无基因毒性。新型纳米根管充填材料 nHA- PA66 在本实验中均未表现出细胞毒性及基因毒性 ,这可由材料的成分得到解释。纳米羟磷灰石是纳米化的羟磷灰石 ,与常规羟磷灰石相比 ,纳米羟磷灰石韧性和物理力学性能 [2 ,3 ] 都大大增强 ,生物相容性及生物活性较前者好 。聚酰胺的生物相容性已得到证实 ,它作为外科用缝线已在临床应用多年 ,能被人体很好的耐受 ,所以它又被称为生物惰性材料。因此作为两者的复合物的新型纳米根管充填材料 nHA- PA66 也具有良好的生物相容性 ,而且由于该复合材料在结构及性能上与人体硬组织的相似性 ,被称为仿生材料 ,其不同的类型的生物活性及生物相容性已在骨科得到临床前期实验验证。本实验的结果也提示该材料可用于口腔。由于体外实验本身的局限性 ,在将新材料应用于临床前应进行系统性的实验研究 ,而不能根据某方面或某个水平的结果就得出生物相容性的结论。本实验是系列实验的一部分 ,对该材料的客观评价将有赖于对从细胞到动物实验结果的综合评价。

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