人牙髓细胞原代培养
核心提示：
牙髓是牙体组织中唯－－种软组织,担负着营养其它牙体硬组织、形成继发性牙本质、传导痛觉以及成牙本质细胞和结缔组织成分对外界刺激产生保护性反应等功能。成纤维细胞是牙髓组织中的主要细胞成分，众多学者通过建立体外培养人牙髓细胞体系，研究牙髓细胞的各种生物学功能，以期为牙髓组织修复再生，牙髓牙本质复合体组织工程发展提供依据。
牙髓细胞原代培养和传代方法 选择20岁以下正畸拔除牙或拔除的阻生智齿，口腔常规消毒。拔牙后在牙颈部磨环形沟，然后投入4℃保 存的含青霉素(100u/ml)、链霉素(100u/ml)的D-Hank’s液中，立即移入超净工作台。将牙齿用D-Hank’s液冲洗3遍，牙钳钳开，滴加DMEM,拔出牙髓，去除根尖部2mm牙髓组织，将牙髓剪成1mm3大小的组
织块，收集组织块，以0.5cm~1cm大小的间距平铺于25培养瓶底，每瓶20~30块，培养瓶内加约1.0ml含20％FBS的DMEM，底朝上置于37℃ 5％CO2培养箱，3－4小时后轻轻翻转培养瓶。3d后首次倒置显微镜下观察细胞生长情况并换液，以后每3d换液一次,观察细胞游出和生长情况。待细胞长满瓶底约80%时吸去培养基，0.25%胰酶消化到细胞回缩，弃去消化液，加培养基终止消化，吸管吹打制成细胞悬液，计数。首次以1:1比例传代，以后根据细胞数量及生长情况1:2或1:3传代。
牙髓细胞原代培养心得 有学者观察了组织块法、酶消化法两种方法，DMEM、RPMI1640两种培养基在人牙髓细胞体外培养中的效果，结果发现组织块和DMEM适合于人牙髓细胞的体外培养。本实验者以DMEM为培养基，采用组织块法原代培养人牙髓细胞，经过多次反复实验获得了成功。但发现只约有1/3组织块可以贴附培养瓶底，贴附的组织块约有1/5可以有细胞游出。同时总结数次失败经验认为选择合适供体牙、操作迅速、确保组织块贴壁是实验成败的关键。
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