关键词：人牙周韧带细胞
 
　　［摘要］  目的：比较骨髓基质细胞与正常人牙周韧带细胞表面抗原的表达情况，探讨牙周韧带细胞与骨髓基质细胞的关系。方法：体外培养人牙周韧带细胞及骨髓基质细胞，采用免疫组化SP法检测细胞中CD14、CD44、CD105、CD34的表达，并进行图像分析。结果：与骨髓基质细胞相似，人的牙周韧带细胞上表达CD44、CD105，不表达CD34、CD14。结论：人的牙周韧带细胞与骨髓基质细胞在表面抗原特性上有相似性。
　　
　　［关键词］  人牙周韧带细胞  骨髓基质细胞  CD14 CD34 CD44 CD105

    牙周韧带细胞是牙周组织中的主要细胞，它对维持牙周组织稳态及修复再生牙周韧带有重要作用。人们一直认为牙周韧带中有前体细胞存在，

　　1  材料与方法

　　1.1  材料  高糖DMEM培养基（GIBCO, USA）,胎牛血清（GIBCO, USA）,青、链霉素（武汉华北制药厂）；小鼠抗人CD14、CD34、CD44、CD105单克隆抗体，SP-9000免疫组化染色试剂盒，浓缩型DAB试剂盒（北京中山试剂公司）；HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像分析系统。

　　1.2  方法

　　1.2.1  细胞培养  牙周韧带来源于因正畸或阻生拔除的健康牙，无菌条件下，刮取牙周韧带，常规组织块法进行原代培养。培养液为20％胎牛血清，100 μg/mL青、链霉素的高糖DMEM培养基，细胞游出前，每5 d换一次液，细胞游出后每3 d换一次液。当细胞生长至90％汇合时，0.25％胰酶消化传代。取3代用于实验。骨髓取自健康成人，注射器肝素化后，抽取骨髓置入预先装有DMEM培养基的无菌离心管中，100目钢网过滤，离心去上层脂肪，采用全骨髓培养法，以1×106个/cm2的密度置于25 mL培养瓶中，培养液为20％胎牛血清，100 μg/mL青、链霉素的高糖DMEM培养基，7 d后首次换液，去除未贴壁的细胞，以后每3 d换一次液。当细胞生长至90%汇合时，0.25%胰酶消化传代，取第3代用于实验。

　　1.2.2  细胞爬片  将牙周韧带细胞消化后，以1×105 个/mL的密度传代至有1 mm×2 mm小盖玻片的培养瓶中，常规培养5 d后，取出小玻片，PBS洗3次，4%多聚甲醛固定15 min，PBS洗3次，细胞面向上粘于载玻片上，自然晾干后，-20 ℃保存备用。

　　1.2.3  牙周韧带细胞的鉴定  采用免疫组化法进行波形蛋白、角蛋白染色，改良Gomo

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