3 讨 论
    Pg与Aa是无芽胞厌氧菌，培养要求高，周期长，易污染且阳性率较低。90年代以来，国外一些学者开始采用PCR进行临床标本中牙周病原菌的检测，该方法操作简单，且具有快速、敏感性和特异性高等优点。本文所采用的Pg 16SrDNA、prtC、fimA和Aa 16SrDNA、lktA引物序列国外文献均有报道［5～8］，Aa fap引物则参考文献后自行设计［9］。本文结果表明PCR检测上述基因具有较高的敏感性。

    由于Pg菌毛和胶原酶、Aa菌毛和白细胞毒素在牙周炎发生和发展过程中发挥了重要作用，本文对上述基因进行了PCR检测，并对检测结果与CP临床症状间的关系进行了分析。不仅包括了CP的典型症状如牙周袋深度、牙槽骨吸收程度和松动度，且对GI和PLI这两个反映牙龈炎症程度和患牙口腔卫生情况的指标进行了分析，较全面地反映了各基因检测和患牙病变程度间的关系。尽管未发现牙槽骨吸收程度和松动度这两个牙周炎重要临床症状与某一毒力基因检测间有何关系，但其余各指标均与一个或几个基因的检测有关。

    菌毛是Pg的重要致病因子，可使Pg与其他细菌发生共聚、粘附于人细胞外基质蛋白及人口腔上皮细胞、诱导牙槽骨吸收、诱生细胞因子、协助Pg入侵上皮细胞并影响细胞免疫反应［10，11］。Watanabe等(1993)首先设计了检测Pg菌毛蛋白亚单位的结构基因(fimA)的特异引物，通过扩增可获得131 bp产物［7］。一般认为fimA的检出与GI和探诊深度弱相关［7］。Amano(1999)等报道在深袋(≥8 mm)中Ⅱ型fimA基因的更易检出［12］。本文结果发现牙周袋深度在7 mm以上时fimA阳性率最高，且GI=2时fimA阳性率最低，与上述报道基本一致，提示fimA基因在中度炎症的深袋中更易检出。

Pg产生的另一重要致病物质是胶原酶，该酶可破坏牙周组织中的Ⅰ型和Ⅳ型胶原［13］。prtC为编码Pg胶原酶的基因。本文结果发现prtC的阳性率与GI有关，GI=1时，阳性率较高，提示可能牙龈炎症较轻时Pg胶原酶所起的作用更大。

    Aa是迄今唯一检测到的具有白细胞毒素的口腔厌氧菌，产白细胞毒素的能力与该菌毒力成正相关［8］。lktA为编码该毒素的基因，目前认为所有Aa菌株都具有lktA基因［8］。本文未发现该基因检测与临床症状有何关系。

    Aa也具有菌毛，但其生物学特性及基因结构等目前知之甚少。Ishihara等(1997)首先对菌毛相关蛋白基因(fap)进行了克隆测序［9］。本文结果发现Aa fap的PCR阳性率与GI和PLI有关。GI=1时或PLI=1时fap检出率较高，说明可能与轻度炎症有关。

    由于16SrDNA为编码细菌rRNA的基因，与细菌毒力无关，因此本文结果中Pg或Aa的16SrDNA检测与临床症状无关。上述推论均有待进一步研究证实。

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