尽管生物膜对抗菌剂的研究越来越多,但要将不同的研究做对比、分析、评价尚存在一定困难,原因有以下几点:首先生物膜的形成,不同的研究者采用不同的方法。其中生物膜黏附材料选择,有玻片、硝酸纤维膜、羟基磷灰石片、牙本质块和自然牙面等;培养环境不同,有一般培养箱、人******腔、恒化器和人口腔等;培养方式不同,有间断培养和连续培养。其次,所选药物本身的特性不同,药物浓度选择、药物作用时间和方式存在差异。第三、观察生物膜对抗菌剂敏感性的方法不同。介绍几种常见的研究方法:①将药物作用后的生物膜震荡,脱落的生物膜细胞接种到琼脂营养平板培养,CFU计数,计算死菌或活菌比。其优点是方法简单,对设备要求低;缺点是操作繁琐,破坏了生物膜,不能观察到生物膜结构变化。②扫描电镜观察。优点 是操作较简单,能直接观测生物膜中细胞情况;缺点是电镜观察需要对生物膜标本进行脱水、固定、包埋、染色等处理,这样会对生物膜结构和其中各成分间相互关系造成变动,观察到的结果就会和实际情况不符。③近几年将激光共聚焦扫描显微镜(confocal scanning laser microscopy,CSLM)逐渐用于生物膜结构观察,虽然其放大倍数低于电镜,但却可以克服电镜的上述缺点。一般只要将生物膜进行荧光染色,就可以直接在CSLM下观察,可以做到原位、实时、动态观察生物膜结构。另外,因为扫描时每层的厚度可以非常薄,所以图像经软件处理后,可以得到生物膜的三维信息[14]。由于存在上述原因,所以在评价、比较不同研究时有相当难度。但综合目前的研究结果,大致可以得到以下一些概念:①口腔中大部分细菌以生物膜形式存在时,对抗菌剂的敏感性比浮游状态时大大降低,甚至可达上百倍。②生物膜的形成时间及其成熟度对抗菌剂的敏感性有一定影响。一般形成时间较长、较老的生物膜对抗菌剂的敏感性比形成时间较短、年轻的生物膜低。③许多作者在讨论中均指出,目前对浮游状态细菌的MIC和MBC(minimum bactericidal concentration)对生物膜的药敏测定并不适用,应该尽快建立一种标准的实验室方法,能测定生物膜相应BIC (biofilm inhibitoryconcentration)和BKC (biofilm killing concentra-tion),用来评价生物膜对抗菌剂的敏感性,并指导临床用药[15]。

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