摘 要:目的:探讨兔颞下颌关节盘前移位后,关节结构中某些细胞外基质成份的改变。方法:在建立颞下颌关节盘前移位动物模型的基础上,通过偏振光显微镜,改良Masson染色以及阿辛蓝染色,观察30只兔关节盘、髁状突的胶原纤维以及糖胺多糖的变化。结果:细胞外基质研究表明,关节盘前移位术后,关节盘中间带胶原纤维明显断裂,双板区出现含胶原纤维的假性关节盘。早期髁状突糖胺多糖丧失,术后4周开始糖胺多糖合成增加。在关节盘穿孔的标本糖胺多糖持续减少。结论:关节盘前移位可导致胶原纤维破坏,糖胺多糖合成增加。发生严重关节软骨破坏的病例中,糖胺多糖合成减少。
细胞外基质(extracellular matrix ECM)包括不同类型的胶原蛋白,各种蛋白多糖或
糖胺多糖,弹性蛋白以及一些具有粘连作用的糖蛋白。由于细胞外基质成分的存在,细胞与细胞才能结合构成组织,细胞外基质的组成与表达,在生理、生化中起着重要的作用。当细胞外基质的组成与表达发生改变时,则可出现病理性改变。本文主要探讨颞下颌关节盘前移位后,关节结构中某些细胞外基质成份的改变。
1 材料与方法
1.1 实验动物
30只日本大耳白兔14~6月龄,2~3kg,5只动物为正常对照组,其余25只随机将一侧关节作为手术组,另一侧关节作为手术对照组。其中1周5只,2周组5只,4周组5只,8周组5只,12周组5只。
1.2 建立动物模型
手术组与手术对照组动物在手术前称体重,耳静脉麻醉。全麻后,消毒,铺巾。切开手术组动物一侧关节区皮肤、皮下组织达骨膜下,用骨膜剥离器翻瓣,显露颞骨颧突根部以及关节结节前方的关节囊,用丝线垂直穿过关节盘前带的延伸部并拉丝线向前,此时关节盘前移。将缝线穿过眶下缘中点前方的颧弓上,并固定[1]。手术对照组的手术步骤与手术组相同,不缝合关节盘前带的沿伸部,也不将关节盘拉向前方。
1.3 动物标本处理
正常对照组动物,手术组与手术对照组动物分别于术后1周、2周、4周、8周、12周,经耳静脉注射过量戊巴比妥钠致死。将兔左、右关节区锯成2cm3的组织块,冲洗,用甲酸枸橼酸脱钙液脱钙2周。脱钙完毕后,用锐利刀片从关节组织块的正中矢状面,将关节组织切成两半。乙醇梯度脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。沿关节标本正中矢状面连续切片5张,切片厚度6μm,分别进行偏振光显微镜观察;改良Masson染色以及阿辛蓝(Alcian Blue)染色。
改良Masson染色方法:石蜡切片脱蜡,蒸馏水洗,入地衣红染色液15min,水洗后再入苏木素染液2min,盐酸分化,水洗显蓝后,入丽春红液3min,水洗。入亮绿染液2min,脱水,透明,封固。染色结果显示:胶原纤维呈绿色,弹力纤维呈棕色,纤维素呈红色。阿辛蓝染色方法:① 5%阿辛蓝醋酸缓冲液(pH5.8)100ml加入0.4mol/L MgCl2。切片脱蜡至水加入上液后过夜,水洗,脱水,透明,封片。结果显示硫酸软骨素和硫酸角质素呈蓝色。② 5%阿辛蓝醋酸缓冲液(pH 5.8)100ml加入0.9mol/L MgCl2。切片染色方法同上。结果显示:硫酸角质素呈蓝色。
2 结果
2.1 偏振光显微镜观察
正常对照组:可见关节盘中间带粗大的胶原纤维束呈连续的前后走向,在前后带见胶原纤维束呈内外走向的横断面。髁状突与关节结节表面有一层连续狭窄的细纤维折射带(图1)。手术对照组与正常对照组相同。
图1 兔正常颞下颌关节偏振光示关节盘中间带前后走向,连续的纤维折射。(偏振光10×) 手术组:25侧中有6侧出现关节盘穿孔,其余关节盘前移位。关节盘前移位的标本术后1,2,4周,中间带断裂呈鳞片状,后带出现前后走向的纤维折射,关节结节表面纤维连续,髁状突部分纤维裂(图2)。术后8周,中间带胶原纤维断裂,髁状突及关节结节纤维变粗。术后12周,关节盘胶原纤维断裂变形,髁状突及关节结节部分区域胶原纤维增厚(图3)。关节盘穿孔的标本,髁状突与关节结节表面纤维消失。 |