二、实验研究

　　1．髓腔细菌培养：

　　（1）仪器与试剂：法国梅里埃公司（biomerieux）生产的厌氧盒（GEN box anaer）及脑心浸液培养基（Brain-heart infusion Broth）。上海医化所试剂厂生产的营养琼脂。

　　（2）接种、培养：将临床收集的39例标本用振荡器振荡5 min，在无菌条件下，立即用无菌移液器倾注2只脑心浸液琼脂平皿中，分别置于厌氧和需氧环境下，37℃恒温培养箱中培养48 h。

　　（3）计数、鉴别：从恒温培养箱中取出平皿，计数各平皿中的可见菌落，乘以稀释倍数，即得到各平皿的厌氧菌、需氧菌的菌落总数。分别取厌氧、需氧各种可见菌落，涂片，革兰染色，镜下鉴别菌的形态和类型并拍照。

　　2．组织病理学检查：切除的45例冠髓组织用10%甲醛固定，脱水、包埋，常规切片，HE染色，镜检。依牙髓状态的组织病理学分类标准［3］作出病理诊断。

　　3．窝洞底部牙本质的扫描电镜观察：随机选出12例髓室顶，用蒸馏水冲洗后放入2.5%戊二醛液中，按扫描电镜标本制作要求进行标本处理，常规临界点干燥，IB-5离子溅射仪中镀铂。日立S-570扫描电镜观察并拍照。

　　结果

　　一、乳牙深龋冠髓的病理改变

　　乳牙深龋冠髓均呈不同程度的病理改变，其中10例（22.2%）牙髓中有少量炎症细胞；33例呈慢性牙髓炎表现，其中牙髓有轻度局限慢性炎细胞浸润者15例(33.3%)，轻、中度广泛慢性炎细胞浸润者13例(28.9%)，重度广泛慢性炎细胞浸润者5例(11.1%)；2例(4.5%)呈急性牙髓炎表现。77.8%的冠髓有不同程度慢性炎症或慢性牙髓炎急性发作。

　　二、乳牙深龋冠髓内细菌感染类型

　　对39例深龋乳磨牙髓腔抽吸物进行的需、厌氧菌培养结果为，厌氧菌感染1例(2.6%)，需、厌氧菌混合感染37例(94.9%)，需、厌氧菌培养阴性1例，无单纯需氧菌感染。不同髓腔中培养出的需、厌氧菌菌落数及需、厌氧菌所占比例差异很大，无规律性。选取各种菌落涂片，染色、镜检后发现，厌氧菌主要为G+链球菌、G+葡萄球菌、G+双球菌、G+球菌、G+杆菌、G-杆菌、G+短小杆菌、G-短小杆菌。需氧菌主要为G+球菌、G-球菌、G+葡萄球菌、G+丝状菌、G+短小杆菌、G-梭状菌、G-杆菌。

　　三、冠髓病理改变与细菌分布的相关性

　　等级相关分析表明：①冠髓病理改变分级与其髓腔内厌氧菌菌落数间无相关性（r′s=0.137，P＞0.2）。②冠髓病理改变分级与其髓腔内需氧菌菌落数间亦无相关性（r′s=0.048，P＞0.5）。

　　四、12例窝洞底部牙本质的扫描电镜观察

　　牙本质小管中有数量、大小不等的球、杆菌。球菌均位于管内，有些小管呈轻度不规则扩张，有些杆菌则通过破坏管壁侵润到管间牙本质（图1，2）。

 　图1　乳牙深龋时窝洞底部牙本质小管中球菌的分布。牙本质小管中有数量、大小不等的球菌，球菌均位于管内（↑），有些小管呈轻度不规则扩张（SEM×2 000）

图2　乳牙深龋时窝洞底部牙本质小管中杆菌的分布。牙本质小管中有杆菌侵入，有些杆菌破坏了管壁侵润至管间牙本质（↑，SEM×3 000）

　　讨论

　　准确判断乳牙深龋时牙髓的病理状态，对选择正确疗法，提高疗效有重要意义。我们对45例深龋乳磨牙冠髓组织的研究显示：77.8%的冠髓表现为不同程度的慢性炎症或慢性牙髓炎急性发作，与国外研究结果相类似［4］。即2/3以上乳牙临床诊断为深龋，而其冠髓实际状态已为慢性炎症。究其原因，可能与乳牙的解剖生理有关。乳牙硬组织薄，牙本质小管粗，细菌及其代谢产物极易进入深层感染牙髓。乳牙牙髓神经纤维呈未成熟状，神经分布较稀疏，对外界刺激和疼痛的反应敏感性差，常常掩盖了病变的真实情况。加之儿童患者往往主诉不清，对客观检查的反应不能准确描述，致使乳牙深龋与慢性牙髓炎在临床上难以鉴别。

　　为了探讨乳牙深龋冠髓病理改变的原因，我们对39例深龋乳磨牙髓腔抽吸物进行了需、厌氧培养，结果表明，37例为需、厌氧菌混合感染，占94.9%；1例为单纯厌氧菌感染；1例菌培养阴性。证实了深龋乳牙牙髓中已有细菌侵入，且以混合感染为主。等级相关分析显示，冠髓病理改变分级与其髓腔内需、厌氧菌菌落数间无相关性，提示冠髓病理改变主要与细菌的侵入及其毒性的强弱有关。