摘　要：目的：研究颊粘膜鳞癌细胞凋亡发生情况，并分析其与临床病理特征及预后的关系。方法：采用末端脱氧核苷酰转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞，计算凋亡指数。结果：本组34例颊癌标本均有凋亡细胞发生，凋亡指数范围为0.12～0.92，均值0.38，凋亡指数与病理学分级之间有关(P＜0.01)，而与临床分期及颈淋巴结转移无统计学意义(P＞0.05)；生存率单因素分析未能揭示凋亡指数高低影响颊癌预后(P＞0.05)。结论：颊癌细胞凋亡的发生与分化恶性程度有关，但凋亡指数不能作为颊癌的预后指标。

　　细胞凋亡不同于细胞坏死，是由基因编程控制的细胞主动死亡形式，又称程序化细胞死亡(programmed cell death)。众多的研究表明，细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，探讨肿瘤细胞凋亡发生与临床病理特征

　　1　材料与方法

　　1.1　研究对象

　　选取1987～1990年间经病理明确诊断为颊粘膜鳞癌的住院患者共计34例，所有患者均经手术治疗，临床及随访资料完整，入院前常规行活组织检查。详细记录肿瘤的部位、大小、临床分期、颈淋巴结转移及病理学分级等临床病理资料以及随访情况(主要临床及病理资料见表1)，其中，颈淋巴结转移是指手术后经病理证实者，随访7～10年，18例死于局部复发及颈淋巴转移。

　　1.2　实验标本

　　将病理科存档的上述34例患者的活检蜡块制成5 μm厚切片2张，分别作凋亡细胞标记及HE染色。

　　1.3　原位凋亡细胞染色(TUNEL法)

　　所用试剂盒为德国宝灵曼公司产品，基本染色步骤如下：石蜡切片于二甲苯中脱蜡；梯度酒精中依次水化；20 g/L蛋白酶K 37 ℃下消化30 min；配制含末端脱氧核苷酸转移酶(I液)和荧光素标记的dUTP(Ⅱ液)混合反应液，加入后37 ℃孵育1 h；再滴加连接碱性磷酸酶的抗荧光素抗体37 ℃下孵育30 min；坚固红呈色；苏木素轻衬染，甘油封片。上述各步骤完成后均经0.01 mol/L PBS洗涤3 min，共3次。实验中同时设不加TUNEL反应Ⅰ液的阴性对照。

　　1.4　细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)测定

　　每张切片选取5个阳性染色最明显的高倍视野(×400)，计数500个肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比，排除成片状细胞染色的坏死区，来源于同一个细胞的多个凋亡小体仅作一个目标记数。

　　1.5　统计方法

　　临床分期、颈淋巴结转移以及病理学分级与凋亡指数的关系采用秩和检验。生存率资料的分析应用Kaplan-Meier法作生存曲线，以log-rank进行统计学处理。

　　2　结　果

　　2.1　颊粘膜鳞癌细胞凋亡的形态学特征

　　原位DNA断裂点标记法可将颊癌凋亡细胞及其形成的凋亡小体同周围细胞明显地区别开来，呈特征性红色着色，染色定位于细胞核，浓缩的核染色质可见到裂解现象，并形成凋亡小体，凋亡细胞及凋亡小体散在分布于颊癌组织中(图1，2)。

图1　颊癌凋亡细胞呈特异性红色着色，胞核固缩(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)

图2　颊癌凋亡细胞核崩解，形成凋亡小体(TUNEL染色，苏木素衬染，×100)(箭头示)

图3　颊癌凋亡指数与病理学分级

　　2.2　细胞凋亡指数与颊癌临床病理特征的关系

　　34例颊粘膜鳞癌均有凋亡细胞的阳性着色，凋亡指数(AI)范围为0.12～0.92，平均AI为0.38。在不同的TNM分期、病理学分级以及有无颈淋巴结转移组中AI分布范围见表1。按各样本AI值大小编秩次，分别对AI与临床分期、有无颈淋巴结转移以及病理学分级的关系进行统计学分析，结果发现，颊癌细胞凋亡发生率与TNM分期、有无颈淋巴结转移无关(P＞0.05)，而与病理学分级之间有统计学意义(P＜0.01)，颊癌恶性程度越高其凋亡发生率越高(图3)。