1.2.5 统计方法 上述实验结果均以±s表示，经t检验确定组间差异的统计学意义。

　　2　结 果

　　2.1　各种处理因素对人髁突软骨细胞前胶原proα₁（Ⅱ）mRNA水平的影响

　　在含0.4％ NCS的DMEM培养基中加入IGF-Ⅰ、 bFGF、TGF-β₁后24 h，软骨细胞proα₁（Ⅱ）的mRNA水平出现不同变化，bFGF显著抑制proα₂（Ⅱ）的表达，为对照组的0. 352倍，TGF-β及IGF-Ⅰ对proα₁（Ⅱ）表达无显著影响(表1、2)。

　　2.2 各种处理因素作用对关节软骨细胞前胶原proα₁（Ⅰ），proα₁（Ⅲ）mRNA水平的影响

　　生长因子作用24 h，软骨细胞proα₁（Ⅰ）mRNA水平在TGF-β₁及IGF-Ⅰ作用下都有不同程度的升高,其中TGF-β₁较为显著。为对照组的1.228倍，IGF-Ⅰ，bFGF与对照相比为1.164及0.840倍。3种生长因子对proα₁（Ⅲ）均无显著作用(表1、2)。

表1 生长因子对人髁突软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

分组	mRNA密度值(±s×103)
	proα1(Ⅰ)	proα1(Ⅱ)	proα1(Ⅲ)
对照组	8．29±0．66	5．13±0．53	4．75±0．98
TGF-β	10．18±0．84*	3．51±0．20*	3．56±0．53
IGF-Ⅰ	9.56±0.12*	5.89±0.22	5.21±1.03
bFGF	7.77±0.14	1.81±0.22**	4.06±0.04

与对照组比较 * P＜0.05 *　* P＜0.01

　　2.3　几种因素作用下前胶原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型mRNA相对值的变化

　　bFGF作用下,α₁（Ⅰ）／α₁（Ⅱ）显著升高，为4.293;TGF-β₁能提高α₁（Ⅰ）／α₁（Ⅲ）值，为2.859(表2)。

表2 生长因子对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA相对水平变化

　　3　讨 论

　　软骨细胞分化状态的改变直接影响软骨基质的生化成份及力学特性。稳定软骨细胞表型,促进其增殖及基质合成，在关节软骨损伤及OA治疗中具有重要意义。关节软骨及软骨下骨质中存在着包括TGF-β、IGF-Ⅰ、bFGF、PDGF等多种生长因子。在局部调节着软骨细胞的分化及代谢^［4］。由于以往的研究对象、组织来源以及细胞分化程度和培养条件等因素不同，结果分歧较大。因而有必要进一步研究不同生长因子对软骨细胞表型稳定性的调节，为生长因子在软骨损伤修复中的应用提供参考。

　　作者以往的研究表明IGF-Ⅰ是软骨细胞分化增殖及代谢的重要调节因子。它可促进细胞增殖及软骨特异性蛋白多糖及胶原的合成。本研究应用狭缝杂交方法，从转录水平进一步证实，在0．4％血清条件下IGF-Ⅰ作用24 h,软骨细胞α₁（Ⅱ）前胶原mRNA水平有一定程度的增加，α₁（Ⅰ）、α₁（Ⅲ）前胶原 mRNA水平略有增加。各种前胶原mRNA相对水平无显著改变。说明IGF-Ⅰ具有稳定软骨细胞表型，促进软骨细胞分化的作用，提示在软骨损伤性疾患治疗中IGF-Ⅰ有着重要的应用前景。

　　TGF-β具有诱导未分化间充质细胞表达软骨特征性表型的作用。但其对分化软骨细胞的影响，目前尚不明确。本研究结果表明，TGF-β能够抑制软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,结合前一部分研究，TGF-β对胶原蛋白合成的抑制作用,可以肯定TGF-β的作用发生在转录水平。但尚不能排除TGF-β对Ⅱ型胶原转录后mRNA稳定性的影响。在TGF-β促进Ⅰ型胶原表达的同时却抑制Ⅲ型胶原mRNA水平，前胶原α₁（Ⅰ）／α₁（Ⅱ）及α₁（Ⅰ）／α₁（Ⅲ）相对值升高。本研究的结果与Galera及Hortonin研究相一致。TGF-β₁对胶原蛋白合成及Ⅱ型胶原基因表达的抑制，研究认为可能是调节了Ⅱ型胶原基因启动子及增强子区域中的DNA序列。Galera的研究还发现TGF-β在抑制原代软骨细胞Ⅱ型胶原表达的同时，促进了“反分化”软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成，说明不同分化状态的细胞对TGF-β的反应性不同